1仪器与材料
1.1动物
SD大鼠66只，体质量（250±20）g，雌雄兼备，由中山大学医学院动物中心提供，合格证号：（粤）2006A064。
1.2仪器
Waters高效液相色谱仪：515 HPLC泵，2487双波长吸收监测器，N-2000双通道色谱工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；TDL80-2B台式离心机（上海安亭科学仪器厂）；SCQ5201超声仪（上海超声波仪器厂）；ZH-2 BLENDER涡旋混合器（天津药典标准仪器厂）。
1.3材料
广西产龙血竭（广西中医学院制药厂提供）；龙血素A对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号：200402）；乙腈、甲醇（色谱纯），乙酸乙酯、无水乙醇、冰醋酸（分析纯）。
2方法与结果
2.2血样的采集和处理
大鼠禁食（自由饮水）12 h后，按100 g大鼠给予龙血竭250 mg，灌胃给药。分别在第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3、4、6、8、10 h于颈动脉取血，置于用肝素预处理过的离心管中。取全血1 mL置离心管中，加入乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL，涡旋混合均匀，3 000 r·min-1离心10 min，取上清液，提取3次，合并上清液，50 ℃水浴挥干，于残渣中加入100 μL甲醇，超声处理使之溶解，12 000 r·min-1离心10 min，取上清液作为样品，注入高效液相色谱仪进行测定，记录色谱图与峰面积，采用外标法定量。
2.3方法学考察[3]
2.3.1龙血素A对照品贮备液的制备取龙血素A对照品，用甲醇配制成每1 mL约含100 μg的溶液，作为对照品贮备液。
2.3.2方法专属性取大鼠2只，实验前禁食12 h，自由饮水，1只做空白对照，1只按100 g给予龙血竭250 mg灌胃给药，给药2 h后取血样，按“2.2”项下方法操作测定。由图1可见，全血中的内源性物质不干扰龙血素A的测定，表明本方法有较好的专属性。[PSD261;S*2〗A.空白血浆； B.空白血浆+对照品； C.样品图1 HPLC图谱Figure 1HPLC chromatograms
2.3.3标准曲线与最低检测限取空白全血适量，精密加入龙血素A对照品储备液，配制质量浓度为0.076、0.151、0.302、0.605、1.209、2.418、4.836 μg·mL-1的系列浓度标准溶液，按“2.2”项下的方法，自“加乙腈2 mL、乙酸乙酯1 mL”起，依法操作，记录峰面积。以质量浓度（ρ）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标进行回归，结果表明龙血素A的质量浓度在0.076～4.836 μg·mL-1范围内与峰面积线性关系良好，回归方程为：A=49679ρ+2784.3，r=0.998 3（n=7）。取标准曲线用溶液，逐步稀释至溶液中龙血素A的响应值约为基线噪音的3倍（S/N=3），记录色谱图，得出最低检测限（LOD）为0.025 μg·mL-1。
2.3.4相对回收率与精密度精密量取对照品储备液，以空白全血分别配成高、中、低3种质量浓度（4.836、1.209、0.076 μg·mL-1）的样品溶液，按 “2.2” 项下的'方法，自 “加乙腈2 mL、 乙酸乙酯 1 mL”起，依法操作。记录峰面积并代入标准曲线计算各样品浓度，计算相对回收率。结果表明，高、中、低3个质量浓度的样品的相对回收率均高于80%。见表1。取以上高、中、低3个质量浓度的样品溶液于同一天内连续测定3次，计算日内RSD;每天测定3种浓度样品各1次，连续测定3 d，计算日间精密度RSD。结果日内和日间精密度RSD值均小于10%，表明该法精密度较好。见表1。
2.3.5样品稳定性精密量取对照品储备液，以空白全血配制质量浓度为0.076、0.605、1.209、2.418 μg·mL-1的样品，分别考察室温25 ℃放置0、4、12、24 h，-20 ℃冰箱放置24 h，-20 ℃下反复冻融3次的稳定性。结果各样品的RSD值均在2.76%～11.42%（n=6）之间，符合《中国药典》相关规定，表明样品稳定性较好。
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